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液质联用检测磷酸化位点
液质联用检测磷酸化位点-详情"过去确定磷酸化位点zuì常用的是逐步化学降解法，如丝氨酸和苏氨酸磷酸化分析方法、酪氨酸磷酸化分析方法。随着生命科学技术的发展，化学方法已经被质谱法所取代，目前可通过液质联用（LC-MS）检测磷酸化位点。液质联用一般是由前端液相色谱+质谱仪组成，液相色谱为分离系统，质谱为检测系统，样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图
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2023-09-18 |
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体内磷酸化位点鉴定
体内磷酸化位点鉴定-详情"体内磷酸化的过程就是在激酶的催化作用下，将三磷酸腺苷（ATP）的磷酸根基团转移到蛋白的氨基酸侧链上，ATP随之变为二磷酸腺苷（ADP）。磷酸化修饰可以发生在多种氨基酸残基上，主要集中在肽链中的酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸残基上，这些残基上具有游离的羟基，且本身不带电荷，当磷酸化作用后，蛋白质便具有了电荷，从而使结构发生变化，进一步引起蛋白质活性的变化。体内磷酸化位点鉴定主要通过质谱法进行
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2023-09-18 |
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无标记磷酸化
无标记磷酸化-详情"蛋白质磷酸化是一种重要的翻译后修饰（PTM），它动态可逆地调控细胞中几乎任意一个生物学过程。伴随着基于质谱的蛋白质组学技术和磷酸化多肽富集方法以及高通量定量技术的不断发展，磷酸化蛋白组学已经成为目前zuì为成熟的PTM研究方向。无标记磷酸化是利用无标记定量方法对具有磷酸化修饰的蛋白质肽段进行相对定量分析，以下将对两种常用的无标记磷酸化检测技术进行简单概述。传统非标记定量（Label Free Quant
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2023-09-18 |
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验证蛋白磷酸化
验证蛋白磷酸化-详情"蛋白质磷酸化在许多生物学过程中起着非常重要的作用，包括细胞生长、增殖、泛素介导的蛋白降解等过程。在研究蛋白的磷酸化修饰过程中，shǒu先需要确定哪些候选蛋白被磷酸化修饰了，确定研究哪些目标蛋白，之后需要靶向的针对这些目标蛋白来分析验证蛋白磷酸化。一般可以通过几下几种方法验证蛋白磷酸化，以内源材料/过表达目的蛋白为例：（1）通过标签抗体（或者目的蛋白一抗）进行免疫沉淀（IP）实验，然后
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2023-09-18 |
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IP-MS打质谱非特异互作的蛋白一般有哪些
IP-MS打质谱非特异互作的蛋白一般有哪些-详情"免疫沉淀（IP）是研究蛋白质相互作用的一种经典技术，而免疫沉淀串联质谱分析（IP-MS）是目前应用zuì广泛的蛋白相互作用研究方法之一。IP-MS的主要原理是基于特异性抗体或其他亲和试剂与靶标蛋白的亲和作用，通过免疫共沉淀（Co-IP）将靶标蛋白与靶标蛋白相互作用的蛋白从复杂的样本中提取出来，进而进行质谱检测以鉴定靶标蛋白的相互作用蛋白。通过IP-MS研究蛋白相互作用以及互作蛋
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2023-09-18 |
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通过IP所得样本进行蛋白质谱分析
通过IP所得样本进行蛋白质谱分析-详情"一般的质谱技术是不能直接研究蛋白互相作用的，需要和其他技术联用，如通过免疫沉淀（IP）所得样本进行蛋白质谱分析，然后再用质谱法鉴定IP所得样品中的蛋白质。甚至于可以比较不同样本中，这些蛋白的相对丰度并寻找差异蛋白。质谱技术不仅能够验证已知蛋白相互作用，还可以鉴定与目标蛋白发生相互作用的未知蛋白。IP即免疫沉淀，它是用靶蛋白的特异性抗体捕获细胞内的靶蛋白复合物。基于“靶
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2023-09-18 |
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IP质谱结果分析
IP质谱结果分析-详情"免疫沉淀（IP）是研究蛋白质相互作用的一种经典技术，而免疫沉淀串联质谱分析（IP-MS）是目前应用zuì广泛的蛋白相互作用研究方法之一。在对IP样品进行质谱检测之后，需要进行IP质谱结果分析才能得出zuì终的结论。在目前的IP-MS处理中，常以蛋白的非标记定量信号强度（LFQ intensity）为指标对蛋白质进行定量分析，可通过选择更高的差异蛋白筛选阈值的设定来对实验组与对照组间蛋白定量差异进行分析。在IP-MS
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2023-09-18 |
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IP后跑胶
IP后跑胶-详情"在获得免疫沉淀（IP）样品之后，由于质谱检测的成本相对较高，需要在IP样品进行质谱检测之前进行IP后跑胶预实验。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分别进行蛋白质印迹（Western blot，WB）及银染或考染预实验,评估该IP样品是否适用于质谱检测。通过SDS-PAGE电泳和银染或考染预实验可评估IP样品蛋白量，WB预实验可评估IP所用抗体的特异性和亲和富集效率。通过加入SDS-PAGE试剂制作SDS-PAGE凝胶板，
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2023-09-18 |
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